La culture cellulaire

SAV (service après vente) Sel sucres vitamines acide aminés (=milieu commerciaux de base)

VACOSS • sels minéraux (Na, Cl, K, P, Mg …»_space; maintien Potentiel mbnR , maintien de la balance Osmotique , cofacteur des Réaction biochimique (POR)) • sucres (sucre en C6»_space; apport NRJ) • Oligo-éléments (fer, zinc …) • Acides aminés (»_space; croissance cellulaires) • vitamines (»_space; vitB, biotine, acide folique, nicotinamide • choline, inositol

SAC-T(hlm • Sels minéraux, nutiments, oligo-éléments, vitamines, cholestérol, acide gras • Facteurs d’Attachement : laminine, fibronectine • Hormones et facteurs de Croissance : insuline, PDGF, EGF, FGF (fin tjs GF + PD(e)F ) • Protéines diverses pour le Transport des Hormones, Lipides et Minéraux

• agent mitogène important • protection contre paramètres physiques (choc, viscosité, osmolarité) • protection contre paramètre chimiques ( ex : inhibiteurs de protéases)

• composition pas bien déterminée • variabilité • difficile d’approvisionnement • possibilité de présence de virus et autres pathogènes • présence d’immunoglobuline

G Pas Cpris La Faille • glycosaminoglycane • protéoglycane • collagène • laminine • fibronectine

• 37°C • 7,2 < pH < 7,4 • 5% CO2 ( et aussi besoin de bicarbonate) • en présence d’HEPES , évite brusques variations de pH • Na et Cl ( osmolarité ) • humidité : 90-95% , évite variations de pressions osmotiques dû à l’évaporation de l’eau

Equilibre bicarbonate/acide carbonique obtenu avec le CO2 en phase GAZEUSE

cellules sanguines

fibroblastes majorité des cellules sont adhérentes

chargé négativement !! en général plastique ou polystyrène qu’on traite pour que charges négatives

• clonage par micromanipulation à partir de colonies obtenues en milieu semi solide • clonage par dilution limite

(SES) game - Séparation sur des paramètres physiques »_space; gradient de densité »_space; adhérence - Séparation à l’aide de marqueurs spécifiques - Enrichissement d’une population à l’aide de facteurs de croissance spécifiques

• Cellules qui se divisent indéfiniment • pouvoir multiplicatif important • Peuvent avoir un nombre de chromosomes anormal (souvent hétéroploïdie) • Morphologie souvent différente des cellules normales

• événement spontané à partir de culture primR (rare) • prélèvement d’une tumeur (cellules tumorales sont pérennisées) • hybridation de cellules (ex:hybrydome) • induction par de virus transformants (EBV ou SV40), agents physiques ou chimiques

-196°C

• DMSO (di.méthyl.sulf.oxide) - glycerol

Les plasmides

plusieurs 100N

VTC • vecteur avec le gène d’intérêt • cellules hôte • une technique

circulaire, bicaténaire réplication épisomiale

• Injection direct dans noyau • infection par virus modifié • électroporation • précipitation au phospate de calcium (qui est endocyté) • fusion par des liposomes • cplx avc le dae dextran (puis endocyté)

il a des charges positives et va donc se fixer sur les charges négatives du plasmide. Le cplx formé le fixe ensuite au cherge négatives de la mb p, puis est endocyté.

choc électrique fait un trou/pore transitoire dans la mb