Chapitre 2 - Outils & Méthodes de Biocell
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L’oeil voit jusqu’à quelle grosseur ?
100 um, soit avant les cellules végétales
Le microscope électronique voit de quoi à quoi ?
1mm à 10 nm, soit jusqu’aux virus et ribosomes !
Le microscope optique permet de voir jusqu’à quoi ?
Cellules aux bactéries !!! (ET NON VIRUS qui sont plus petits que 100nm ))) 1mm à 99nm
La cristallographie permet de voir…
Virus, ribosomes jusqu’aux atomes ! 100nm à 0.1nm
Dans un microscope occulaire, qu’est-ce qui est ls première lentille ?
Condensateur !
Dans le microscope occulaire, qu’est-ce qui inverse l’image du condensateur ?
Objectif !
Quand y a t-il de la diffraction ? Et comment cela affecte-t-il l’image ?
Quand l’image est de taille similaire à la longueur d’onde. Les contours sont moins nets, il y a une limite de résolution optique.
La distance minimale pour distinguer deux points dépend de quoi ?
La longueur d’onde !
Quelle est la limite de résolution d’un microscope optique ?
0.2um
La taille des bactéries est d’environ quelle grosseur si on compare aux longueur d’ondes ?
Environ celle de la lumière visible !
Pour augmenter l’angle de réfraction, on peut….
• Approcher l’objet (projection conique) - Augmenter la taille de l’objet
Pour augmenter l’indice de réfraction, on peut…
Ajouter de l’huile !
Pour diminuer la longueur d’onde on peut….
Utiliser une plus petite longueur d’onde EX: Rx
Quels sont les problèmes des gros échantillons ?
• Lumière doit passer au travers - Interprétation des images
Quels sont les solutions aux problèmes des gros échantillons ? (Lumière qui passe au travers)
• Microtomes (tranches minces sur cire), fixation, déshydratation, erobage • Crysolats (tranches minces échantillon gelé)
Quelle est la solutino à l’interprétation des images des grosses coupes ?
Regarder plusieurs coupes
Le contraste des images peut être amélioré de quelles façon ?
1- coloration sélective (ex: safarine) 2- traitement d'image --> soustraction arrière plan --> égalisation d'histogramme --> déconvalution (filtre)
Améliorer la résolution ?
Approcher l’objectif
Comment fonctionne l’immunofluoresence ?
Purifier l’antigène désiré (ex : tubuine). Injecter l’Ag à un animal d’une autre espèce avec un bon système immunitaire. Receuillir l’anticorps Ac produit par l’animal. Purifier l’Ac, et le cloupler à un fluorescent. Traiter la préparation avec l’Ac flurescent.