2.1- Les enzymes de restriction

ADN retiré d’un ou plusieurs organismes et ressoudés (recombinés) à l’ADN d’une cellule hôte

dérive d’un ADN recombinant

molécule composée d’acide nucléique servant de véhicule capable de se répliquer dans une cellule hôte

molécule d’ADN recombinante

• construction du vecteur+insert 2.réplication et production de l’ADN dans des cellules hôtes pour générer du matériel 3.purification et séquençage du fragment d’ADN (insert) 4.insertion de l’ADN recombinant (vecteur+insert) dans le modèle cellulaire à l’étude 5.analyses biochimiques et cellulaires

endonucléases produites par des bactéries qui reconnaissent des régions à séquence spécifique (4 à 18 pb) et clivent les deux brins d’ADN au niveau de ces sites

régions à séquences spécifiques (4 à 18 pb) reconnus par les enzymes de restrictions

protège l’ADN de la bactérie hôte du clivage, en le modifiant au niveau de chaque site potentiel ou a lieu l’activité endonucléase (ou près de celui-ci) en ajoutant un groupement méthyl à une ou deux bases, habituellement dans le site de restriction

CH3 terminal

virus qui infecte seulement les bactéries

reconnaissent une séquence d’ADN spécifique et coupent en un endroit aléatoire, assez loin du site reconnu (jusqu’à quelques centaines de pb de loin)

reconnaissent une séquence spécifique et coupent une partie spécifique de cette séquence plupart reconnaissent et coupent dans un site palindromique spécifique types IIa reconnaissent des séquences palindromiques et coupent à l’extérieur du site de restriction type IIb coupent à chaque extrémité (5’ et 3’) du site de restriction

ciblent seulement les ADN méthylés

fragments qui possèdent une queue ou une région débordante (overhang) aux deux extrémités sont toujours complémentaires aux autres fragments produits par la même enzyme de restriction

régions simples brins des fragments cohésifs peuvent s’apparier transitoirement aux extrémités des autres fragments caractérisés par les mêmes bouts

bouts cohésifs qui débordent en 5’ ou 3’

tous les nucléotides présents aux extrémités sont appariés à des nucléotides dans le brin complémentaire, donc aucun bout simple brin débordant

ensemble de fragments coupés de façon reproductible à partir de l’ADN d’une origine par une enzyme de restriction

donne l’ordre et la fréquence des sites de restrictions le long d’une molécule d’ADN et la taille des fragments produits